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AGL1感受态细胞
点击次数:268      发布时间:2019-06-23

AGL1农杆菌感受态细胞


AGL1 Chemically Competent Cell

产品编码:                         保存条件: -80℃   
产品规格:

AGL120×100μl
pCAMBIA2301control vector10ng/ul      10ul

                
AGL1农杆菌感受态细胞基因型;
C58 RecA (rif R/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA (strepR) Succinamopine

AGL1农杆菌感受态细胞简要说明:
 AGL1菌株为C58, RecA型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件, pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pTiBo542DT-DNATi质粒含有筛选标签:strep,赋予AGL1菌株链霉素抗性,适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率可达5×103cfu/μg。
 
AGL1农杆菌感受态细胞操作说明:

  1.  -80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
  2.  100μl感受态加1ug(体积不大于10ul)质粒DNA,用手管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
  3.  加入700μl无抗生素的LBYEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4。 6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。

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