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分享一组JM109感受态细胞操作说明和注意事项
点击次数:28 发布时间:2019-07-08 返回
分享一组JM109感受态细胞操作说明和注意事项
   JM109感受态细胞操作说明:
  1.CMbioJM109感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
  2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
  3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
  4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
  5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
  JM109感受态细胞是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。JM109菌株的基因型为:endA1recA1gyrA96thihsdR17(rk-mk+)relA1supE44D(lac-proAB)[F’traD36proABlaqlqZΔM15]v产品特点:recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组,提高纯化质粒的产量和质量。
  注意事项
  1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2、本产品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。
  3、混入质粒或连接产物时应轻柔操作,感受态细胞zui好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
  4、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
  5、新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
  6、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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