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高灵敏ECL发光试剂1
更新时间:2019-04-28
产品型号:
描述:高灵敏ECL发光试剂产品组成:
超敏ECL发光剂/增强剂,50ml
超敏ECL过氧化物/稳定剂,50ml

高灵敏ECL发光试剂1的详细资料:

高灵敏ECL发光试剂 Western Chemiluminescent HRP Substrate

Cat No. KTSM1901

简介:
本ECL试剂盒是基于鲁米诺(luminol)的高灵敏底物体系,用于在免疫印迹实验中检测辣根过物氧化酶(HRP)。试剂盒中的增强剂使得本试剂盒能检测fg至pg级抗原,背景干净。可以使用X光片或化学发光成像仪进行检测。由于本产品灵敏度高,检测丰度高的抗原,如actin等时,应适当降低一抗及二抗的浓度。


高灵敏ECL发光试剂运输和保存条件:
室温运输。收到试剂后请避光,4度保存。室温保存时,底物可以稳定保存6个月;4度保存时,可以保存1年以上。

产品组成:
超敏ECL发光剂/增强剂,50ml
超敏ECL过氧化物/稳定剂,50ml


高灵敏ECL发光试剂注意事项:
1. 为获得结果,请优化实验条件,包括样品,封闭试剂,洗涤液,一抗,二抗的选择及孵育时间等。
2. 在转膜,封闭,洗涤及一抗二抗孵育过程中防止膜干掉。
3. 为保证结果,请使用使用脱色摇床等设备,充分洗涤一抗二抗等。
4. 由于抑制HRP的活性,请尽量避免使用,尤其在二抗孵育时,不能加叠。
5. 与膜接触时,请使用干净的手套或镊子,避免蛋白污染。
6. 底物尽量现配现用。在室温条件下,配制好的底物可以稳定8小时。避免强光照射底物。短时间日光灯照射不影响配制好的底物的效果。


高灵敏ECL发光试剂使用方法(X光片):
1. 根据样品中抗原的浓度及一抗的效价,用一抗孵育印迹膜室温2小时或4度过夜。
2. 充分洗涤后,二抗室温孵育1小时。再充分洗涤后。
3. 按需要量将发光剂和过氧化物按1:1比例充分混匀得到发光物工作液。按1平方厘米印迹膜0.1ml工作液准备。
4. 弃去洗涤液,将工作液加到印迹膜上,孵育5分钟。
5. 将印迹膜取出,并吸去多余的工作液。
6. 将印迹膜放置于两层干净的保鲜膜或塑料保护壳之间,去除其中的气泡。
7. 将印迹膜吸附蛋白的面向上放置,置于X光片盒中,在暗室内压上X光片适当的时间。进行显影和定影。

使用方法(化学发光成像仪):
1. 第1-5步与X光片方法相同。
2. 将印迹膜放置于成像仪的合适位置。
3. 选择信号累积模式采集信号。

常见问题,可能原因及解决方案

 

胶片反相(白色条带,黑色背景)系统中HRP过量稀释HRP标记物至少10倍以上
膜上出现棕色或黄色条带
暗室中看到强烈发光
发光信号持续时间过短
信号较弱或者无信号发光反应系统中HRP过多,消耗底物过快,引起信号迅速降低稀释HRP标记物至少10倍以上
抗原/抗体量不够增加抗原/抗体使用量
蛋白转移率低优化转移系统
高背景系统中HRP过量稀释HRP标记物至少10倍以上
封闭不足优化封闭程序
封闭试剂选择不当选择另一种封闭试剂
冲洗不充分增加冲洗时间,次数
曝光过度减少曝光时间
抗原/抗体浓度过高降低抗原/抗体使用浓度
蛋白条带为点状蛋白转移失败优化转移过程
膜未平衡按照说明书处理膜
胶片与膜之间有气泡曝光前去除所有气泡
出现非特异条带
(高背景、信号维持时间较短)
系统中HRP过多稀释HRP标记物
出现非特异条带
(背景干净信号维持时间正常)
一抗用量过多进一步稀释一抗
SDS导致非特异结合在实验过程中避免使用SDS
 

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